问题 问答题

简述双脱氧链终止法测定DNA碱基序列的原理。根据下列图谱给出被测定链的基因序列和方向。

 

答案

参考答案:

正常的体外合成体系中,DNA聚合酶在引物的引导下,沿模板链的3’→5’方向移动,利用体系中的4种2’-脱氧核糖核苷酸(dNTP)聚合成一条与模板互补(沿5’→3’方向)的DNA新生链。如果在体系中加入2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),当它们掺入正在合成的新链DNA后,由于其在脱氧核糖3’位置上没有羟基,因而不能与后续dNTP的5’磷酸基团之间形成磷酸二酯键,合成中的新DNA链在这个位置上终止延伸。这样如果在DNA合成体系中,既有正常反应所需的4种dNTP,同时又加入了一定比例的ddNTP,那么新合成的DNA链在掺入这种dNTP的位置,即可能掺入同种ddNTP,导致新合成链在凡是应该掺入这种核苷酸的位置就有可能随机终止。由于存在这样一种ddNTP与同种dNrrP的竞争,合成产物即为一系列长度不同的多核苷酸片段。这些片段的5’端是固定的,而终止点随模板链碱基序列而改变。5’GCGAAGAGT 3’

填空题
单项选择题