问题 填空题

红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:

(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:_______、_______、_______和______。

(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。

①.加入柠檬酸钠的目的是_____________________。

②.在样品处理中包括红细胞的洗涤、___________________、分离血红蛋白溶液、透析。

③.洗涤红细胞的目的是____________,你如何知道红细胞已洗涤干净?___________

④.分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是_________________。

⑤.若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_____________________。

(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。

①.透析的目的是_____________________________。

②.透析的原理是_____________________________。

(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

①.样品纯化的目的是__________________。

②.血红蛋白有什么特点?____________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义?____________________。

答案

(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定

(2)①.防止血液凝固       ②.血红蛋白的释放      ③.去除杂蛋白      离心后的上清液没有黄色      ④低速短时间离心,如500r/min离心2min        ⑤.离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度

(3)①.去除相对分子量较小的杂质      ②.透析袋能使小分子自由进出,而大分子则保留在袋内

(4)①.通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂蛋白除去         ②.血红蛋白呈现红色 在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液,这使血红蛋白的分离过程非常直观,大大简化了实验操作。

多项选择题
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