因为(x-

1

x

)n的展开式的二项式系数之和为64，所以2ⁿ=64，所以n=6，

由二项式定理的通项公式可知 T_r+1=

C

r6

x6-r(-

1

x

)r=(-1)r

C

r6

x6-2r，

当r=3时，展开式的常数项为：-

C

36

=-20．

故答案为：-20．