问题 问答题

试述测定血样中药物浓度之前去除蛋白质的意义与方法。

答案

参考答案:(1)意义:去除蛋白质可使结合型的药物释放出来,以便测定药物的总浓度;可预防提取过程中蛋白质发泡,减少乳化的形成;可以保护仪器的性能如保护HPLC柱不被沾污,延长仪器的使用期限。
(2)去除蛋白质的方法:①加入水溶性的有机溶剂,使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而凝聚,使与蛋白质结合的药物释放出来。常用的水溶性有机溶剂有乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。②加入中性盐,使溶液的离子强度发生变化。中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来,使蛋白质脱水而沉淀。常用的中性盐有饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等。③加入强酸,当pH低于蛋白质的等电点时,蛋白质以阳离子形式存在,强酸与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。常用的强酸有10%三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸—钨酸混合液、5%偏磷酸等。④加入含锌盐及铜盐的沉淀剂,当pH高于蛋白质的等电点时,金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用的沉淀剂有CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH等。⑤酶解法,在测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物时常用此法。最常用的酶是枯草菌溶素。⑥加入水不溶性有机溶剂进行液-液萃取,常用的水不溶性有机溶剂有乙酸乙酯、乙醚等。⑦其他如加入强碱,固相萃取小柱萃取,在线处理,超高速离心等。

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