问题
问答题
TFⅢA是5S rRNA基因表达所需的转录因子,这个蛋白含有9个锌指结构域,与5S rRNA基因内的一段序列和5S rRNA本身结合。
如何定位TFⅢA蛋白的DNA结合位点
答案
参考答案:分离一个带有5s rRNA基因的限制性片段。用多核苷酸激酶标记两个5’末端,用限制性内切酶切割其中一个标记末端。用纯化过的TFⅢA结合于DNA上,然后用DNase Ⅰ处理,在胶上分析切割产物,蛋白质结合的位置就是DNA上没有被消化的区域。实验中需要设计一个不加蛋白质的对照,并且要确定DNaseⅠ的浓度。