细菌和真菌的生活需要一定的条件，如水分、适宜的温度、还有有机物．因此首先②要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制，然后把培养基和所有用具进行④高温灭菌，以防杂菌对实验的干扰，为防止高温杀死细菌、真菌，要等冷却后，在进行③接种，接种后放在温暖的地方进行①恒温培养．注意：定期观察并详细记录实验现象．故顺序为②④③①．

故选：B．