参考答案：

可用两种方法：RACE方法和构建cDNA文库。

RACE是一项在已知cDNA序列基础上快速扩增缺失的5’或3’端序列的技术，依赖于RNA连接酶连接和寡聚帽子的快速扩增。

扩增未知片段的操作包括：

(1)获取高质量总RNA；

(2)去磷酸化作用；

(3)去掉mRNA的5’帽子结构，加上特异性RNA寡聚接头并用RNA连接酶相连接；

(4)以特异性寡聚dT为引物，在逆转录酶作用下，逆转录出cDNA第一链，包含寡聚接头的互补序列；

(5)分别以 cDNA第一链为模板进行RACE。3’RACE以5’基因特异序列和3’端寡聚dT下游部分序列为引物进行PCR扩增，获得基因的3’序列。5’RACE以5’端RNA寡聚接头的部分序列和基因特异的3’端反向引物进行PCR，获5’端序列；

(6)将纯化后的PCR产物克隆到载体DNA中，进行序列分析，获5’或3’端序列后，设计全长基因的两侧引物，进行全长基因的扩增，获得全长基因的克隆。

构建cDNA文库包括：

(1)mRNA的制备；

(2)逆转录生成cDNA；

(3)cDNA与噬菌粒载体分子相连；

(4)噬菌粒的包装。

构建高质量cDNA文库后，利用已知部分片段作为探针，对文库进行筛选，可筛出全长基因的克隆。