问题
问答题
把SOD基因转入烟草,从载体的选择到外源基因的表达,列举你用的步骤。
答案
参考答案:SOD基因首先克隆入合适的克隆载体,再转入植物双元表达载体,使SOD基因连入双元表达载体的MCS中,上游是CaMV启动子,利用双元载体的T-DNA进行基因的转移、整合。重组的双元表达载体以土壤根瘤农杆菌介导,转入烟草愈伤组织,利用叶盘法进行转化,外源SOD基因整合到烟草基因组中,伴随宿主基因的表达而表达。转基因植株的筛选可首先利用T-DNA左右边界间的抗性标记进行,如抗卡那霉素标记。抗性植株再进行Southern杂交,确证DNA水平上SOD基因的整合;进行Northern杂交,确证SOD的转录;进行Western杂交确证其表达的蛋白质。