问题
问答题
碱变性法是如何制备质粒DNA的原理是什么?
答案
参考答案:
用碱变性抽提质粒DNA的技术是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。先用pH 12.6的NaOH溶液处理细胞,染色体DNA氢键断裂,双螺旋结构打开变性,质粒DNA大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的双链不会完全分离,当用pH 4.8的NaAc高盐缓冲液调节pH至中性时,变性的质粒DNA将恢复原来的双螺旋结构,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性,形成了缠绕的网状结构,通过离心,染色体DNA与蛋白质等一起沉淀而被除去,溶液中只有双链的质粒DNA,再用乙醇或异丙醇把质粒DNA沉淀出来,制备出质粒DNA。