问题 问答题

试阐述代表差示分析技术(representational difference analysis,RDA)。

答案

参考答案:RDA属表型克隆方法的一种,用于基因表达差异分析。它结合了PCR技术和消减杂交技术的优点,能有效地分离在一个cDNA群体中存在而在另一cDNA群体中不存在的基因序列。
其原理是利用PCR技术可以指数形式扩增双链DNA,而以线性形式扩增单链模板的特性,通过降低cDNA群体复杂性和更换cDNA接头等方法,特异性扩增目的基因片段。此技术流程大致是:先从两种材料制备cDNA,再进行限制性酶消化和扩增。一种材料的扩增产物可以通过退火连到特殊接头上,该接头为特有的一对PCR引物提供退火位点。这些接头不加到驱动cDNA中。大大过量的驱动cDNA(100:1)加到受试cDNA中,并混合,由于驱动者/驱动片段无接头,无法扩增,杂交的驱动/受试片段只有一个引物退火位点,只按线性方式扩增,可用核酸晦消化。而受试的cDNA在两条链都有接头,可以进行指数扩增,扩增产物可以分离和克隆。

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