问题 问答题

试述探针的种类及其制备。

答案

参考答案:根据核酸分子探针的来源和性质,可以分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡核苷酸探针。
(1)基因组DNA探针:从基因组文库中筛选得到一个特定基因(或基因片段)的克隆后,大量扩增、纯化,即可作为探针使用,但这些片段可能含有内含子序列。
(2)cDNA探针:由于cDNA中不存在内含子及其他高度重复序列,因此是一种较为理想的核酸探针。以mRNA为模板,在逆转录酶作用下,合成cDNA后,将其克隆于适当的载体上,通过扩增重组质粒而使cDNA得到大量扩增。制备质粒后,用限制酶切割重组质粒,将cDNA片段切割下来。分离纯化,即可作为探针使用。
(3)RNA探针:将目的基因克隆到带有SP6或T7启动子的质粒中,插入到启动子下游。再用适当的限制酶在插入序列的下游切断质粒,使其线性化,加入RNA聚合酶、4种NTP,其中一种为α-32P标记的NTP。以目的基因的DNA为模板,体外转录出高放射性活性的RNA探针。
(4)寡核苷酸探针:根据已知的核苷酸序列,采用DNA合成仪合成一定长度的寡核苷酸片段,亦可作为探针使用。若核苷酸序列未知,可根据蛋白质的氨基酸序列推导出核苷酸顺序,合成相应的寡核苷酸片段作为探针。寡核苷酸片段长度大多在15~30个核苷酸之间。

阅读理解与欣赏

阅读下面两段文字,回答问题(15分)

(甲)通计一舟,为人五;为窗八;为箬篷,为楫,为炉,为壶,为手卷,为念珠各一;对联、题名并篆文,为字共三十有四;而计其长曾不盈寸。盖简桃核修狭者为之。嘻,技亦灵怪矣哉!

(乙)其法:用胶泥刻字,薄如钱唇,每字为一印,火烧令坚。先设一铁板,其上以松脂、蜡和纸灰之类冒之。欲印,则以一铁范置铁板上,乃密布字印,满铁范为一板,持就火炀之;药稍熔,则以一平板按其面,则字平如砥。若止印三二本,未为简易;若印数十百千本,则极为神速。常作二铁板,一板印刷,一板已自布字,此印者才毕,则第二板已具,更互用之,瞬息可就。每一字皆有数印、如“之”“也”等字,每字有二十余印,以备一板内有重复者。不用,则以纸帖之,每韵为一帖,木格贮之。有奇字素无备者,旋刻之,以草火烧,瞬息可成。不以木为之者,文理有疏密,沾水则高下不平,兼与药相粘,不可取;不若燔土,用讫再火令药熔,以手拂之,其印自落,殊不沾污。其印为予群从所得,至今保藏。

小题1:下面句子中划线的词用法相同的一项是    (         )  (2分)

A.真不知马也

B.简桃核修狭者为以手拂

C.为字共三十奇字素无备者

D.人五其印予群从所得小题2:解释下面句子中划线的词。(3分)

(1)桃核修狭者:                    

(2)                      用之

(3)用讫再令药熔:                     

小题3:甲文中有一个表示评价和赞美的句子,写出并翻译。(3分)

(甲)文:                                                                   

译文:                                                                      

小题4:乙文介绍活板的排版先后有五个步骤,它们的正确顺序是怎样的?请将它们的字母按顺序写在横线上。(2分 )

A 以火熔药 B 用药物蒙盖铁板 C 按平版面 D 设置铁板E 排列字印

                  

小题5:甲文中提到的微雕属于民间技艺。除此之外,你喜欢的民间技艺还有哪些?写出一种并说明喜欢的理由。(3分)

小题6:乙文为了说明活字印刷“活”的特征,运用了恰当的说明方法,主要用了

                      等说明方法。(2分)

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