问题 问答题

如何利用T4 DNA聚合酶制备平末端?

答案

参考答案:

T4 DNA聚合酶具有5’→3’聚合酶和3’→5’外切核酸酶两种活性,并且当反应体系中具高浓度的dNTP时3’→5’外切降解作用将会停止。当需制备平端的双链DNA分子具5’突出末端时,加入高浓度的dNTP,使T4 DNA聚合酶表现5’→3’聚合酶的活性,把末端填补成平端。当需制备平端的双链DNA分子具3’突出末端时,不加dNTP,使其表现高的3’→5’外切酶的活性,将3’突出末端切成平末端。

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