参考答案：

定点突变的方法是利用引物引导的DNA扩增导入突变。用化学合成法合成含一个或多个突变碱基的单链寡核苷酸引物(突变位点可在引物5’端引物中，但不能在3’端)，采用两种PCR方法均可进行定点突变。

(1)重叠延伸技术：先将模板分别与两引物对(正向诱变引物FM和反向引物R₂及正向引物F₂和反向诱变引物RM)退火，经PCR扩增出两种靶基因片段，FMR₂和RMF₂片段在重叠区退火，用DNA聚合酶补平缺口，形成全长双链DNA，进行PCR扩增，则F₂和R₂扩增出带有突变位点的全长DNA片段。

(2)大引物诱变法：先用正向突变引物(M)和反向引物(R₁)扩增模板DNA，产生双链大引物，与野生型DNA分子混合后退火并使之复性。第二轮反应中加入正向引物，与PCR 1中产生的一条互补链配对，扩增产生带突变的双链DNA。由于F₂的退火温度显著高于M和R₁引物，所以可以忽略M和R¹的干扰。大引物和F₂共同扩增出定点突变的片段。