问题
问答题
外源基因与载体的连接主要有哪几种方法?
答案
参考答案:
(1)黏性末端连接:①同一限制酶酶切位点的连接;②不同限制酶酶切位点的连接,如同尾酶酶切片段之间的连接。
(2)平端连接:DNA连接酶可以催化相同或不同限制性内切酶切割的平端之间的连接。
(3)同聚物加尾连接:在末端转移酶的作用下,在DNA片段末段加上同聚物序列,如多聚A或多聚T之间的退火完成连接。
(4)人工接头连接:人工合成含有某些限制酶切点的寡核苷酸片段,在T4 DNA连接酶的作用下,将接头连接到目的DNA片段的两端,再用相应的限制酶切割,使外源DNA片段的两端具有黏性末端,可与相应的载体连接。