问题
问答题
简述把一段DNA克隆进入pUC18质粒的Pst工位点的过程,如何筛选含目的片段的克隆?
答案
参考答案:
利用化学合成含PstⅠ的识别位点的一段人工接头,用连接酶连接到DNA片段两端或利用PCR在设计引物时加上PstⅠ的识别位点,扩增产物即为具PstⅠ识别位点的DNA。由PstⅠ切割DNA两端,具PstⅠ黏性末端的DNA可用连接酶连入pUC18质粒的PstⅠ位点。
筛选含目的片段的克隆时,初筛可利用Lac Z的蓝白斑反应,白斑可能为含外源片段的克隆。该白斑经扩增提取质粒后,用PstⅠ酶切,如确能切出相应长度的片段,该克隆应是含目的片段的克隆。