问题
问答题
SAGE技术的操作流程是什么?
答案
参考答案:
SAGE的操作流程:(1)提取mRNA;(2)逆转录反应合成cDNA双链;(3)用特定限制性内切酶——锚定酶(4碱基识别位点)AE消化cDNA双链;(4)分离3’端酶解片段,并分为两份,分别与含Ⅱ类标签酶的识别位点的连接子1和连接子2结合;(5)用标签酶酶切,将含有连接子1和连接子2的样品混合,形成双标签;(6)根据连接子1和连接子2的序列设计引物,进行PCR扩增;(7)经PAGE电泳回收目的条带,用AE酶切,回收连接双标签;(8)克隆、筛选和测序,进行基因的鉴定和表达频率分析。