问题
问答题
试述酵母双杂交技术及其应用。
答案
参考答案:此技术首先运用基因重组技术把编码已知蛋白的DNA序列连接到带有酵母转录调控因子(如GAL 1、GAL 4)DNA结合结构域(BD)编码区的表达载体上,导入酵母细胞使之表达带有DNA结合结构域的杂合蛋白,与报告基因上游的启动调控区相结合,作“诱饵”,捕获与已知蛋白质相互作用的产物。若将编码激活结构域(AD)的DNA分别与待筛选的cDNA文库中不同插入片段相连接,重组在表达载体中,转化含有“诱饵”的酵母细胞。一旦酵母细胞表达的诱饵蛋白与转入的某一“猎物”蛋白质发生相互作用,AD和BD结构域就被牵引靠拢,激活报告基因表达,分离具报告基因活性的细胞,得到所需的“猎物”载体,从而获得与已知蛋白质相互作用的新基因。