问题 问答题

试述mRNA差别显示技术的原理及技术流程。

答案

参考答案:mRNA差别显示技术是一种方便、快捷,能够一次比较多个样品的基因表达差异的技术。其原理是用成对的较短的简并引物扩增部分cDNA片段的集群。如用相同的引物组扩增两个不同组织中的cDNA,扩增产物由测序胶并列分离,就会产生条带图谱的差异,找出差异表达的基因。技术流程如下:
(1)逆转录:用3条与mRNA 3’端匹配的锚定引物合成cDNA,锚定引物含有特异性的二碱基延伸的寡聚T引物,可以结合到mRNA的3’端。(2)PCR扩增:用锚定引物与随机引物对逆转录产物进行PCR扩增。(3)凝胶分离:用测序胶分离扩增产物,以条带的有无和强弱寻找不同材料中差异表达的基因。(4)差异条带的克隆、测序:回收DNA差异条带,再进行克隆和测序,所得差异片段可作为进一步分离基因的探针,是比较基因表达差异的最有效方法。

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