问题
问答题
普通PCR与RT-PCR的区别为何用RT-PCR进行扩增
答案
参考答案:区别:(1)普通PCR的模板是DNA双链,RT-PCR的模板是mRNA;(2)普通PCR所需酶类为Taq酶,RT-PCR除Taq酶外,还需逆转录酶逆转录出cDNA第一链,然后再进行PCR反应;(3)RT-PCR逆转录反应在42℃进行,然后再将反应混合物加热至95℃,5min,使逆转录酶失活,以反应产物为模板进行PCR扩增。
在进行真核生物基因研究时,真核生物为断裂基因,基因组DNA既有外显子,又有内含子,DNA转录为RNA,并形成成熟的mRNA后,才能除去内含子,所以进行RT-PCR可以扩增到基因的开放 阅读框,不包括内含子,原核生物中没有内含子的剪接机制,真核基因的内含子无法在原核生物中正确剪接,所以研究真核基因应用RT-PCR进行扩增。