参考答案：B

解析：A、限制性内切酶切割DNA，获取目的基因；正确。B、DNA复制时，DNA聚合酶将单个脱氧核苷酸到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键；正确。C、DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，形成重组DNA；正确。 D、mRNA在反转录酶的作用下合成目的基因；正确。考点：重组DNA技术中常用的酶。点评：考查了学生知识迁移和应用能力，如基因工程的过程，可以很快解决此题。