参考答案：A, C

解析：：①限制酶：识别DNA分子中某种特定核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子，使磷酸二酯键断开；②DNA连接酶通过形成磷酸二酯键，从而将两条DNA片段连接起来；③解旋酶是一类作用于氢键的酶，能够使氢键断开，把双链DNA打开；④DNA聚合酶主要是连接单个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起作用。A.基因工程中所需的工具酶是限制酶和DNA连接酶；正确。B.PCR会用到热稳定DNA聚合酶，不需要解旋酶，用高温解旋；错误。C.③作用于氢键，①②④中的酶作用的都是磷酸二酯键；正确。D.④脱氧核苷酸脱水聚合形成DNA中会产生水；错误。考点：限制酶、DNA连接酶、解旋酶、DNA聚合酶的作用。点评：本题设计较为巧妙，考查四种酶的相关知识，提升了学生提取信息和分析问题的能力。