简述单克隆抗体制备的基本原理。
参考答案:
解析:抗原免疫小鼠的脾细胞(合有B细胞)能产生特异性抗体,但在体外不能无限增殖;小鼠骨髓瘤细胞在体外适当条件下可无限增殖,但不能分泌抗体。将上述骨髓瘤细胞与免疫脾细胞在PEG作用下进行细胞融合后,在HAT选择性培养基(含次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T))中培养,未融合的免疫脾细胞(B细胞)因不能在体外存活而死亡,未融合的骨髓瘤细胞因其DNA合成主要途径被氨基蝶呤(A)阻断,同时又因缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),不能利用次黄嘌呤(H)完成DNA的合成过程而死亡。只有融合细胞囚从脾细胞获得HGPRT,故可在 HAT选择培养基中存活和增殖,形成杂交瘤细胞,其既有骨髓瘤细胞大量增殖的特性,又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。由于每个杂交瘤细胞由一个B细胞融合而成,而每个B细胞克隆仅识别一种抗原表位,故经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌一种同源抗体,即为单克隆抗体。