参考答案：D

解析：能发生质壁分离现象的细胞必需是成熟的植物活细胞，即有细胞壁，有大的液泡，细胞保持活性。如果操作步骤完全正确的情况下，细胞没有出现质壁分离现象，则该同学所使用的实验材料可能是根尖分生区细胞，没有大的液泡；动物细胞，没有细胞壁；死细胞，已失去活性；去除了细胞壁的植物细胞，没有细胞壁。所以选D。