问题
问答题
酵母双杂交
答案
参考答案:酵母双杂交系统(Y2D:Yeast two-hybridization)一种常用的研究活细胞蛋白质间相互作用的技术。该技术在真核模式生物酵母中建立,通过对报告基因表达产物的检测可以获知蛋白质之间的相互作用,敏感性很高,即使很微弱或瞬时的作用也可以检测出。
酵母双杂交的主要原理如下:许多真核生物的转录激活因子都可分解为两个功能独立的结构域—DNA结合域(DNA binding domain,BD)和转录激活域(Activation domain,AD),例如酵母的转录激活因子GAL4,就是由N端的BD和C端的AD组成的。GAL4分子的DNA结合域可以和上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)结合,而转录激活域则可以激活UAS下游的基因使之转录。但是BD和AD只有结合在一起才能发挥下游基因激活作用,单独的BD或AD都不能激活UAS的下游基因。基于此原理,酵母双杂交技术将两种目标蛋白分别与BD、AD连接后导入酵母细胞中,若目标蛋白间有相互作用,则BD、AD结合在一起,下游报告基因表达出可检测产物;若目标蛋白间无相互作用,则BD、AD不能结合,无法检测到报告基因产物。