问题 问答题

设计构建一个载体,将目的基因在植物根系表达并向根细胞外分泌。请详细写出各步骤。

答案

参考答案:(1)目的基因获取:若目的基因序列已知,直接设计相应引物,通过RT-PCR扩增该基因的cDNA序列:如目的基因序列未知,可根据其相似物种的同源基因的保守区设计引物,RT-PCR扩增得到目的基因cDNA序列。此外,如果该基因的产物氨基酸序列已知,可以反推出简并性mRNA序列,进而设计引物克隆得到cDNA序列。
(2)目的基因克隆:将PCR产物与TA克隆载体连接后,通过酶切实验对重组质粒进行验证。验证无误后将重组质粒导人大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,扩增目的基因。
(3)表达载体构建:
1)选择一个合适的真核表达载体,如pBI121、pCAMBIA等。通常该载体应含有多克隆位点、启动子、报告基因、抗性基因、蓝白斑筛选标记等必需组分。
2)载体特异要求:若让目的基因在植物所有组织细胞中表达,则选用载体自带的强启动子;若让目的基因只在根细胞中表达,则可以克隆一个植物根细胞特异性表达基因的启动子,连入表达载体作为目的基因的启动子;目的基因产物属分泌型,需要在表达载体中目的基因前端连入合适的信号肽序列。
(4)阳性重组质粒鉴定:将已构建的表达载体导入大肠杆菌中筛选阳性克隆,通过酶切、PCR、测序等方法均可鉴定阳性重组。
(5)转化植物细胞:将阳性重组质粒导入植物细胞。可选直接基因转移技术(包括基因枪法、原生质体法、花粉管通道法、PEG介导转化方法等)或牛物介导转化法(主要有农杆菌介导和病毒介导),其中农杆菌介导广泛应用于双子叶植物的遗传转化。
(6)筛选阳性克隆:PCR检验目的基因是否已导入靶细胞,也可用生化方法检验目的产物的表达。
(7)植物组织培养:获得植株,最后收集产物。

阅读理解与欣赏

课外阅读。

桂林山水之美

  “桂林山水甲天下。”“桂林是东方的瑞士!”这些赞美的语言,使桂林不但驰名中国,而且饮誉世界了。     

  桂林  山青  水秀  洞奇  石美  号称四绝。   

  桂林山水,应该说是独具一格(别具一格 千篇一律)的。飞机掠过桂林上空的时候,人们从舷窗向下望,就可以看到这一带特有的山峰,像犀牛,像田螺,像竹笋,像伏兽般的岗峦,令人感到奇特(普通  特别)而新颖。等到你(zháo  zhuó)陆之后,亲自踏访一番,就会越发惊异于这些山峰千奇百怪的形态。它们有的像老人,有的像巨象,有的似骆驼,有的宛若瓶子,一首诗禁不住会扑进你的心扉:“桂林多洞府,疑是馆群仙。四野皆平地,千峰直上天。”对!桂林就是这般(mó  mú)样。这些山已经够奇了,而无数的深邃瑰丽的岩洞更奇;还有一条明镜澄碧的漓江把这一带的风景区联结起来,加上许多神话传说和历史故事,这就使得桂林山水在中国、在世界享有这么高的荣誉了。     

  桂林的风景线长达100千米,这里奇峰矗立,绿水萦回,船移景变,静态极妍。它是风景的长廊,是无声的诗,是立体的画,是形象化了的音乐。

1.用“√”选择加粗字的正确读音。

2.给短文第2自然段加标点。

3.用“______”画出加粗词语的反义词。

4.短文中画“______”的句子运用的修辞手法是(  )。

5.短文与《桂林山水》一文的相同点是:开头________________。不同点是:《桂林山水》不但写了________________,而且写了________________,短文则重点描写了________________,略写了________________和岩洞。

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