试述如何从土壤中分离出产生淀粉酶的芽孢杆菌的方法步骤。
参考答案:
(1)确定方案:首先查阅资料,了解所需菌种的生长培养特性。
(2)采样:选取离地面515cm处的士,用小铲子取样,将采集到的土样盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中。
(3)增殖:称取0.5g土样(湿重),加到含10ml25%无菌土样浸出汁的试管中,于37℃、150rpm条件下振荡培养25min,以适宜的样本稀释液系列稀释培养液。然后取O.1ml涂布于已添加及未添加富集底物的士浸出汁平板。37℃下皿底朝上培养4气10d,将长出的菌落接入斜面,但应挑取单菌落。
(4)分离:利用产物特性分离得到产目标产物的纯种。
初筛:将细菌接种到含有淀粉的牛肉膏蛋白陈固体培养基中进行培养,如果细菌产淀粉酶则在菌落周围培养基出现透明状态,可以根据透明圈大小初步筛选出产淀粉酶高的菌种。
镜检:将初筛菌种进行芽抱染色,在显微镜下观察,选取有芽抱生成的杆菌。
复筛:将菌种在斜面培养纯化后,接到牛肉膏蛋白陈液体培养基中37℃培养24ho利用其产淀粉酶的特性进一步鉴定。