男，12岁，左大腿下端持续剧痛伴高热3天，寒战，头痛。食欲差。查体：体温39℃，左大腿下端稍肿，局部皮温高，深压痛，右膝活动时疼痛加重。化验检查：白细胞1.8×10/L，中性粒细胞75%。

对确诊最有价值的辅助检查是（）

A.X线片检查

B.结核菌素试验

C.膝关节穿刺

D.局部分层穿刺

E.肌肉活检