参考答案：D

解析：①在基因工程中，将目的基因与载体DNA拼接的酶是DNA连接酶。该酶可催化DNA中相邻的5’． 磷酸基与3’-羟基末端之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封闭，或使两个DNA分子(片段)连接。② DNA聚合酶I、限制性内切核酸酶、反转录酶也是基因工程中常用的工具酶。③DNA聚合酶Ⅲ不是 基因工程需要的工具酶。