参考答案：

1）DNA的纯度：DNA等都会影响酶的活性。

2）DNA的甲基化程度：dam甲基化酶（修饰GATC中的A.；dcm甲基化酶（修饰CCA/TGG的C.。

3）温度：不同的限制性内切酶的最适反应温度不同。大多数是37oC，少数要求40-65oC。

4）缓冲液（Buffer）：是影响限制酶活性的重要因素。