大量输血后患者发生手足搐搦的原因是（）

A.库血中血小板破坏

B.血钙浓度降低

C.酸中毒

D.钾离子浓度增高

E.碱中毒

下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。

【资料1】巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达【5’AOX1和3’AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子】。

【资料2】巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。

酶切获取HBsAg基因后，需用（）将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取（）。