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什么是同聚物加尾连接法?用何种方法加尾?具有哪些优缺点?

答案

参考答案:

所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸,制成人工黏性末端,外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸,如dA(dG)和dT(dC.,然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能,将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子,该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸,如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。

同聚物加尾法实际上是一种人工黏性末端连接法,具有很多优点:

(1)首先不易自身环化,这是因为同一种DNA的两端的尾巴是相同的,所以不存在自身环化。

(2)因为载体和外源片段的末端是互补的黏性末端,所以连接效率较高。

(3)用任何一种方法制备的DNA都可以用这种方法进行连接。

同聚物加尾法也有一些不便之处:

(1)方法繁琐;

(2)外源片段难以回收。由于添加了许多同聚物的尾巴,可能会影响外源基因的表达。另外要注意的是,同聚物加尾法同平末端连接法一样,重组连接后往往会产生某种限制性内切核酸酶的切点。

改错题

作文修改。下面是某学生写的周记片断,根据文后要求修改。

       一送里格红军,今晚,打开电视,就听到了这首红军长征的歌,使我不由地激动不已,我感情的潮水涌动在我的血液中。

       在红军长征历史纪念馆中,到处摆放着旧衣、旧鞋、旧家具,虽然都是些旧得一文不值的东西,但在老一辈革命家认为:他们是宝,是珍宝,因为它们见证了红军长征的珍贵光辉历史,它们记录了红军与人民同舟共济一起取得辉煌胜利的经过。

       展馆中,有一条木船,那是红军经过于都一条湖时人们帮助红军过河借给红军的船,这条黑色小木船凝聚了多少人民支持红军的心啊!不止这条船,当地百姓甚至还把家中的门,箱子还有棺材为战士们架起了一座座浮桥。一座金色的船,它载着战士通向对岸,通向光明的未来。

(1)画线的比喻句表述不当,请加以修改。

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(2)除了画线部分,文中在表达上还有多处错误,请选择3-4处在原文上加以修改。

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