参考答案：

①除DNA片段的单链突出端，使之成为平端，利于某些情况下片段间连接；

②去除cDNA合成时形成的发夹结构；

③施行S1核酸酶保护试验，分析转录产物；

④成熟mRNA与基因组DNA杂交后，S1核酸酶水解可确定内含子在基因组DNA中定位；

⑤修整、渐进性删除突变末端。