参考答案：

A.分离、提纯载体和目的基因，并加以鉴定B.用限制性核酸内切酶将载体切开以便插入目的基因C.将载体和目的基因结合成重组体D.将重组体转化为宿主细胞E.将含目的基因的细胞筛出并鉴定F.克隆基因表达.