参考答案：D

解析：限制酶不只在获得目的基因的时候才用，在相同的特定切点上切开使得目的基因与运载体在DNA连接酶的作用下“缝合”为一体，所以A错；重组质粒在细胞外完成，所以B错；我们要求运载体有几个特点：(1)标记基因；(2)能自主复制；(3)不危害宿主。有的质粒没什么特点，观察不到，那就不能做运载体，有的质粒上有危害宿主的基因，也不能做运载体，所以C错：可以根据蛋白质的氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列，推测结构基因的核苷酸序列→化学合成目的基因，所以D是正确的。