男孩，12岁，左大腿下段持续剧痛伴高热10天，体温39～40℃，寒战，头痛，食欲差，查体：左大腿下段稍肿，局部皮温高，深压痛，右膝活动时疼痛加重，化验：血白细胞18×10/L，中性75%，淋巴细胞25%，为明确诊断应选择的检查是()

A．结核菌素试验

B．局部分层穿刺

C．X线片摄片

D．膝关节穿刺

E．肌肉活检