问题 填空题

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:

限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ
识别序列及切割位点

G GATC C

C CTAG G

A AGCT T

T TCGA A

G AATT C

C TTAA G

CCC GGG

GGG CCC

为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在()的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。

答案

参考答案:蔗糖为唯一含碳营养物质

解析:

(1)质粒是双链环状DNA分子,在SmaⅠ切割前没有游离的磷酸基团,SamⅠ作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键,切割产生的DNA片段末端是平末端,因而质粒经切割后含有2个游离的磷酸基团。(2)质粒的热稳定性主要由氢键的数量决定,氢键数量越多,质粒的热稳定性越高,反之则低,DNA分子中A与T之间存在2个氢键,C与G之间存在3个氢键,因此DNA分子中G—C碱基对越多,热稳定性就越高,SmaⅠ识别CCCGGG序列,并在C和G之间将这段序列切开,也就是质粒中SmaⅠ酶切位点越多,G—C碱基对越多、热稳定性越高。(3)据图1可知,SmaⅠ切割的位点在抗生素抗性基因之间,抗生素抗性基因是标记基因,应尽量避免破坏,据图2可知SmaⅠ切割的位点在目的基因之中,破坏了目的基因,所以不能使用SmaⅠ切割。(4)用同种限制酶切割后的质粒和目的基因,在基因表达载体构建时,常形成三种直接方式,其中目的基因与目的基因的连接、质粒与质粒的连接是无效的连接,用两种限制酶可避免此类现象。(5)基因表达载体的构建过程中需加DNA连接酶,连接脱氧核糖和磷酸。(6)抗生素抗性基因属于标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。(7)目的基因是蔗糖转运蛋白基因,将其导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后,应进行目的基因的检测与鉴定,可根据受体细胞是否含有蔗糖转运蛋白,即是否具备吸收蔗糖的能力判断基因工程是否成功,因而可在含有蔗糖(唯一碳源)的培养基中培养。

选择题
问答题

甲企业与乙企业均为增值税一般纳税人。甲企业是生产企业。乙企业是商业企业,丙企业是物流企业,2011年3月各企业经营情况如下。
(1)乙企业从甲企业购进商品,取得增值税专用发票,注明价款210万元;货物由丙企业负责运输,运费由甲企业负担,丙企业收取运输费用7万元、装卸费2万元,并给甲企业开具了运费发票。
(2)乙企业以收取手续费方式销售一批代销货物,开具普通发票,注明金额152.1万元,向购买方收取送货运费5万元,向委托方收取代销手续费3万元。
(3)甲企业一年前销售给乙企业一批自产产品合同规定,货到付款,因乙企业资金紧张,一直拖欠货款,经协商双方同意进行债务重组。甲企业应收账款21.4万元:乙企业以总价值(含增值税)为18.72万元的货物抵偿债务,并开具了增值税专用发票,注明价款16万元、增值税2.72万元,抵偿后其余账款甲企业作损失处理;甲企业又将该批货物销售给丙企业,取得含税销售收入20万元。
(4)甲企业从国营农场购进免税农产品,收购发票上注明支付货款20万元,支付丙企业运费3万元,取得运费发票;将收购农产产品的10%作为职工福利,15%的部分捐赠给受灾地区,其余作为生产材料加工食品,所加工的食品在企业非独立核算门市部销售,并取得含税销售收入25.74万元。
(5)乙企业从农业生产者手中购进玉米,取得收购凭证,支付价款10万元,支付给丙企业运费1万元,取得运费发票。
(6)甲企业销售使用过的一台进口小汽车,取得销售收入28万元。
(7)甲食业购进再生资源,取得符合税法规定的抵扣发票,支付价款2万元,支付运费0.6万元,取得货运发票。
(8)乙企业以库存的货物向甲企业投资,经税务机关核定,该批货物同期市场含税价93.6万元,已向甲企业开具库存货物的增值税专用发票。
题目中所涉及货物增值税税率均为17%。本月取得的相关发票均在本月认证并抵扣。
要求:根据上述资料,按下列序号计算回答问题,每问需计算出合计数。

甲企业当月可抵扣的进项税额;