问题
问答题
用1 mol酸水解五肽,得2个Glu,1个Lys;用胰蛋白酶裂解成两碎片,在pH=7时电泳,碎片之一移向阳极,另一移向阴极;碎片之一用DNP水解得DNP-谷氨酸;用胰凝乳蛋白酶水解五肽产生两个二肽和一个游离的Glu,写出五肽顺序。
答案
参考答案:用1 mol酸水解,得2个Glu,1个Lys,由于酸水解时Trp完全破坏,且Asn;Gln的酰胺基常被水解生成相应的氨基酸Asp、Glu和氨气,所以从回收的氨基酸情况可以推测该五肽的氨基酸组成为2Glx、2Trp、1Lys。(2)用胰蛋白酶裂解五肽,得两个肽碎片,由于该酶专一性很强,它只断裂Lys或Arg羧基端形成的肽键,所以Lys必定位于五肽的中间,-Lys-。(3)用胰凝乳蛋白酶水解五肽产生两个二肽和一个游离的Glu,因为胰凝乳蛋白酶可水解Trp羧基端形成的肽键,所以可推知该肽的氨基酸序列为:X-Trp-Y-Trp-Glu。结合(2)可知该五肽序列为X-Trp-Lys-Trp-Glu。(4)碎片之一用DNP水解得DNP-谷氨酸,DNP是鉴定N端氨基酸,所以该五肽为:Glx-Trp-Lys-Trp-Glu。(5)用胰蛋白酶裂解成两碎片,即为Glx-Trp-Lys和Trp-Glu,在pH=7时电泳,Trp-Glu带负电荷,向阳极移动;而Glx-Trp-Lys向阴极移动,说明Glx是Gln而不是Glu。综上所述该五肽的序列为:Gln-Trp-Lys-Trp-Glu。