问题
问答题
一种全长不超过3kb的小质粒上有如下的序列: 5′……NNNNNNATTAGGCCTAATN……3′ 我想把第二个C改变成T,你看该怎么办想把第二个C去掉呢
答案
参考答案:
解析:如果想把第二个C改变为T,我们可以先设计一个突变引物,序列为5′-NAT-TAAGCCTAATNNNNNN-3′,将5′末端磷酸化之后,与目的片段混合退火,在Klenow大片段的催化下,合成出全长的互补链,再由T4 DNA连接酶封闭缺口,最终合成出异源双链的DNA分子,转化大肠杆菌细胞,筛选突变体,鉴定突变基因。 如果想把第二个C去掉,也可以先设计一个突变引物,序列可为:5′…NATTAGCC-TAATNNNNNN…3′,其他程序同上。 (胡英考 答)