什么是Western Blot和Southern Blot请分析二者在技术上的三个共同点和应用上的主要区别。
参考答案:[答题要点]
(1)Western Blot就是蛋白质免疫印迹。将经过凝胶电泳分离的蛋白质条带,原位电转移至能吸附蛋白质且有一定机械性能的薄膜上,然后分别与目标蛋白的特异抗体以及酶标二抗进行孵育结合,最后加入酶底物进行反应,使与抗体特异结合的蛋白质条带显色,从而使目标蛋白得到鉴定。
(2)Southern Blot即DNA印迹。将DNA样品进行限制性内切酶处理,并用琼脂糖凝胶电泳将不同长度的DNA进行分离,然后将DNA变性并原位电转移至硝酸纤维素膜,与带有标记的核酸探针(已知序列)进行杂交反应,从而使能与探针互补的DNA片段得到检测。
技术相同点:都涉及凝胶电泳分离;都有分离条带向膜的转移;都需要特异反应。
应用区别:Western Blot用于蛋白质鉴定;Southern Blot用于DNA鉴定。
解析: 蛋白质免疫印迹技术;DNA印迹技术;有关操作技术要点。
[知识扩展] Western Blot和Southern Blot是两种不同的生物化学技术。前者用于蛋白质鉴定,后者用于DNA鉴定。另外还有一种类似技术是Northern Blot,适用于RNA分析。这几种技术在应用上虽然相差很远,但操作环节上有许多共同点,如上所述。其中,特异反应指的是Western Blot需要用能识别目标蛋白质的特异抗体进行膜的孵育;而Southern Blot和Northern Blot需要与目标核酸互补的特异核酸探针。至于凝胶种类、电泳槽形状、显色系统、检测方法等虽有不同,但不是主要的。