问题 问答题

在测定酶的活力时,除了配制所需要的底物、缓冲溶液外,许多情况下还要配制高浓度的“三氯乙酸”试剂。请问:在酶活测定中,三氯乙酸的生物化学作用是什么如果样品“测定管”中加入各试剂的顺序是:缓冲液→酶→底物(保持反应时间)→三氯乙酸,请问在“对照管”中三氯乙酸何时加入合适

答案

参考答案:[答题要点]
(1)三氯乙酸是有机酸,高浓度有机酸可使蛋白质变性沉淀。在到达酶反应时间后,加入高浓度三氯乙酸,不仅可以使酶蛋白变性,终止酶反应,还能使酶蛋白形成沉淀,便于利用离心技术除去,从而有利于酶反应产物的定量测定。
(2)在对照管中,三氯乙酸应先于酶加入,使酶彻底变性失活;然后再加入底物,反应相同时间。

解析: 酶活力测定;酶变性失活;实验对照设计。
[知识扩展] 科学研究需要严格设计对照实验。对于酶促反应,最重要的空白对照实验是先将酶变性失活,再加入底物,保持相同反应时间。仅设计不加入酶的空白对照是不完全的。空白对照的操作顺序通常是:缓冲液→酶→三氯乙酸→底物(保持反应时间)。这样,整个反应系统的组成是一样的,只是“测定管”中用的是活性酶,而“对照管”中用的是变性酶。

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