问题
问答题
可以用来分离获得目的基因的实验技术主要有哪些试用其中一种技术克隆水稻的耐盐基因。
答案
参考答案:PCR技术;southern杂交技术;RACE技术;cDNA差示分析法,酵母单杂交法,酵母双杂交系统,图位克隆法,基因芯片技术等。
其中一种可行的方案:
可用mRNA差异显示技术将其耐盐基因克隆出来,具体方案如下:
(1)从耐盐和不耐盐的细胞群体中分别抽提mRNA,并以3’锚定引物作为逆转录引物,合成第一链cDNA:
(2)用5’随机引物和某个3’端锚定引物对扩增第一链(掺入32p-dNTP);
(3)用DNA变性测序胶分离扩增产物,X光片曝光后检测差别条带;
(4)回收特异性差别条带;
(5)用同一引物对扩增已回收的DNA条带;
(6)用Northern、Southern杂交及测序法分析所得条带的序列;
(7)以该DNA片段做探针,筛选全长cDNA或核基因。