参考答案：

革兰染色法的操作与步骤如下：

（1）标本片制作：取材涂片干燥固定

（2）染色步骤：

第一液碱性结晶紫，初染1min，水洗；

第二液碘液，媒染1min，水洗；

第三液95%乙醇，脱色，30s，水洗；

第四液稀释石炭酸复红，复染30s，水洗.

（3）镜检：光学显微镜放大1000倍，观察其形态，染色性，经革兰染色将细菌分为两大类，一类是革兰阳性菌呈紫色；一类是革兰阴性菌呈红色.

（4）革兰染色的意义：①鉴别细菌；②指导选择用药；革兰阳性菌对青霉素敏感；③致病性方面，革兰阳性菌大多数以其外毒素致病，革兰阴性菌以其内毒素致病.