问题 问答题

如何用动物细胞融合技术证明生物膜的流动性

答案

参考答案:[答题要点]
(1)不同物种动物细胞表面具有特异蛋白。分别针对特异蛋白对两种细胞如人细胞和鼠细胞进行不同荧光基团(如红色和绿色)标记,使人细胞呈现红色荧光,鼠细胞呈现绿色荧光,然后合适条件下保温,促进两种标记细胞的融合。
(2)在不同时间取样置于荧光显微镜下观察。如果在融合初期看到的杂合细胞的两半分别呈现不同颜色荧光,而当融合到一定时间后,两种颜色的荧光点转变为均匀分布,即可证明膜蛋白在脂双层中发生了“流动”。

解析: 生物膜流动性;细胞融合;细胞表面抗原。
[知识扩展] 动物细胞没有细胞壁,膜表面有特异蛋白,可直接进行免疫荧光标记。有不同的荧光标记物,分别呈现红色、绿色、黄色、蓝色等,它们需要一定波长的紫外光激发才能看到。利用细胞融合技术证明膜蛋白流动,必须用不同荧光标记不同细胞。如果用植物细胞,需要首先去掉细胞壁,然后用原生质体操作。由于大多数本科生尚未直接接触过此类实验,在回答时,常出现关键技术错误,如“进行放射性标记后进行光学显微观察”。殊不知放射性标记是不能用光学显微镜直接观察的。有的虽然提到用抗体标记,但没有明确针对不同细胞膜特异抗原(或蛋白)标记,显得思路不清。证明膜蛋白的流动性还可用光漂白技术,就是先将活细胞的某种蛋白进行荧光标记,荧光显微镜下可见整个细胞呈现均匀荧光;然后再用激光对细胞某一点进行连续照射,使发生光漂白。此时,可见照射点的荧光被猝灭,显示为无荧光区。之后将细胞在合适温度下放置一定时间再观察。如果整个细胞表面又呈现均匀分布的荧光,则可证明生物膜上的蛋白质发生了流动。

单项选择题
判断题