问题 问答题

简述T细胞增殖试验和细胞毒试验的基本方法。

答案

参考答案:

解析:T细胞增殖试验分为非特异增殖和特异性增殖两类,前者用植物血凝素等有丝分裂原激活T细胞,使其增殖分化,反映机体免疫功能状态;后者在培养细胞中加入特异性抗原,只有该抗原特异T细胞发生反应,反映机体特异性细胞免疫功能。增殖过程中,细胞DNA、RNA、蛋白质合成增加,细胞形态改变,最终细胞分裂。常用检测方法有:①3HTdR掺入法,细胞增殖水平越高,掺入的放射性核素越多,测定样品放射活性,可反映细胞的增殖状况。②MTT法,PBMC与PHA共育,加入MTT,用酶标仪测OD值,反映细胞增殖水平高低。
细胞毒试验用于测CTL、NK细胞对靶细胞损伤作用,常用方法如下:①51Cr释放法,靶细胞溶解破坏与51Cr释放成正比。②乳酸脱氢酶释放法:当靶细胞受损时,酶将从胞内释放至上清,通过上清中酶活性的检测,可以计算出效应细胞杀伤靶细胞的活性。③凋亡细胞检查法:某些因素能够诱导靶细胞发生凋亡,也是免疫应答杀伤靶细胞的一种形式。凋亡是细胞内源性DNA酶被被激活,将染色体DNA酶解,使细胞发生程序性死亡。可以采用琼脂糖电泳法、TUNEL法、流式细胞术等方法来检测靶细胞的凋亡事件,从而评估对靶细胞杀伤的效应。

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