问题
问答题 简答题
TFIILA是5SrRNA基因表达所需的转录因子。这个蛋白质含有9个锌指结构域，与5SrRNA基因内的一段序列和5SrRNA本身结合。（1）如何定位TFIIIA蛋白的DNA结合位点？（2）什么样的突变体可以确证锌指是DNA结合所需的？
答案
参考答案：
（1）分离一个带有5S基因的限制性片段。将两个5′端用多核苷酸酶带上标记，将其中一个标记的末端用限制性内切核酸酶切割。用纯的TFIIIA结合于DNA上，然后用DnaseI处理，在胶上分析切割产物。蛋白质结合的位置就是DNA上没有被消化的区域。记住要有一个不加蛋白质的对照，并且要滴定DnaseI的浓度。
（2）通过点突变确定哪些残基的突变会丧失锌结合能力。