参考答案：D

解析：本题考查酶催化活性浓度测定时对底物浓度的要求，酶催化活性浓度测定时一般选择零级反应期，即底物过量，应使[S]＞Km，一般为Km的10～20倍，则Km可忽略不计，米氏方程简化为v=V，限速因素是被测酶的活性。