参考答案：D

解析：考点：基因工程常用工具酶。在基因工程中，构建重组DNA分子时，必须在DNA连接酶作用下，才能使目的基因与载体DNA共价相连。DNA聚合酶Ⅰ、反转录酶、限制酶等不参与拼接过程。基因工程中不需要DNA聚合酶Ⅲ。