患者，男，62岁，进行性吞咽困难2个月，1周来仅能进流食。X线食管造影：食管中段约5cm长不规则样狭窄，管壁僵硬，蠕动消失。

有关诊断，哪种病可能性大（）。

A.贲门失弛缓症

B.反流性食管炎

C.食管裂孔疝

D.食管癌

E.食管平滑肌瘤

培养细菌和真菌的步骤：①制作培养基②高温灭菌③接种④在（）中培养。