子代个体中出现了亲代没有的性状，新出现的性状一定是隐性性状，亲代的基因组成是杂合的．因此一对双眼皮的夫妇生了一个单眼皮的孩子表明单眼皮是隐性性状，父母控制双眼皮的基因组成是杂合的即一个显性一个隐性．假设双眼皮由显性基因A控制，单眼皮由隐性基因a控制．遗传图解如图：

从图解中可以看出他们若再生一个孩子，则该孩子为单眼皮的可能性是25%，即1/4．

故选：B．