参考答案：E

解析：凝胶过滤层析。凝胶过滤层析是根据分子体积的大小分离的手段，与分子是否带电荷或被吸附关系不大。层析柱内填满带有小孔的颗粒，蛋白质溶液加于柱之顶部，任其往下渗漏，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱中滞留时间较长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出，因此不同大小的蛋白质得以分离。分子大的蛋白质先被洗脱下来。马肝过氧化氢酶（相对分子质量247500）分子量最大，体积最大，所以最先被洗脱。胰岛素（相对分子质量5733）分子量最小，体积最小，所以最后被洗脱。